-
טלפון
+86-0755 2308 4243
-
כתובת
חדר 309, בניין Meihua, פארק התעשייה של טייוואן, מס' 2132 Songbai Road, מחוז באואן, שנזן, סין
-
דוא
שאלות נפוצות
באילו מתודולוגיות סינתזה משתמשת Biorunstar עבור סינתזת פפטידים?
RE: Biorunstar פיתחו מתודולוגיות שונות של סינתזה בשלב הפתרון כדי לענות על דרישות הלקוחות. בדרך כלל, מיושמת כימיה של Fmoc שלב מוצק.
איך שולחים פפטידים? אילו נתוני QC יסופקו?
RE: כל הפפטידים יישלחו על ידי DHL או FedEx express כמו באבקה ליאופיל בבקבוקונים בודדים המסומנים היטב, בטמפרטורת החדר. למעט פפטידים גולמיים, שייבדקו רק באמצעות ספקטרומטריית MALDI-MASS, כל הפפטידים המטוהרים הסינתטיים מגיעים עם דוח פרויקט (CoA), נתוני MS ונתוני HPLC. יסופקו דפי נתונים המכילים את מאפייני המפתח, כגון רצף פפטיד, טוהר, כמות, שינוי, נתוני ספקטרום המונים ונתוני HPLC.
מהו זמן הסיבוב האופייני לסינתזת פפטידים? כמה זמן לוקח לשלוח אליי?
RE: זמן החזרה האופייני שלנו הוא 2-3 שבועות עבור פפטיד סטנדרטי מתחת ל-30 חומצות אמינו. זמן הסיבוב משתנה בהתאם לאורך הפפטיד, כמות, מסיסות וקושי. בדרך כלל 3-5 ימים להגיע לחוקרים במדינות אחרות.
כמה זמן אתה יכול לסנתז?
RE: ל-Biorunstar ניסיון רב בסינתזה של פפטידים ארוכים, עד 130aa. בניגוד לספקי פפטידים רבים שנוח להם לייצר פפטידים מתחת ל-30 או 40aa, ל-Biorunstar יש ניסיון טוב בייצור פפטידים הנעים בין 40aa ל-90aa. קשה לסנתז פפטידים ארוכים, במיוחד 100aa או יותר. אם אתה מתכנן לסנתז רצף של 130aa או יותר, אנא צור איתנו קשר לקבלת שירות ביטוי וטיהור חלבון מותאם אישית.
מה אם יתעוררו בעיות במהלך הסינתזה או תהליך הטיהור?
RE: לכל פפטיד יש את המאפיינים הספציפיים שלו. אם כמה בעיות קורות במהלך הסינתזה מעבר לציפיותינו, ואיננו יכולים לספק את הפפטיד שלך בזמן, נודיע לך בהקדם האפשרי. במקרה שלא נוכל לייצר את הפפטיד, לא תחויב בשום עלויות.
צורת מלח TFA, צורת מלח אצטט או HCl: באיזו צורה עלי לבחור?
כברירת מחדל, פפטידים מסונתזים במלח TFA. עבור ניסויים הקשורים לתאים או רקמות, כדאי לשקול לייצר פפטידים בצורת מלח אצטט או HCl ב-98% ומעלה כדי למנוע תגובות חריגות. ניתן לבקש אצטט או מלח HCl בעלות נוספת.
מהם חיי המדף של פפטיד?
RE: פפטידים יציבים למשך שנה לפחות אם הם מאוחסנים בליופיליזציה במקפיא. אם פפטידים מומסים, חיי המדף עשויים להצטמצם. אם פפטידים מכילים מספר חומצות אמינו תגובתיות שניתן לחמצן כמו Trp, Met אבל במיוחד Cys, חיי המדף עשויים גם להיות מופחתים.
הפפטיד מכיל מספר ציסטינים ולכן יכול ליצור בקלות קשרים דיסולפידים. איך אני נמנע מזה?
RE: אם רצף הפפטידים מכיל מספר ציסטינים, או חומצות אמינו תגובתיות אחרות, אשר מתחמצנות בקלות, Biorunstar מציעה לספק את הפפטיד עם עקבות של המפחית החזק DTT. הפפטיד מסופק עם DTT רק אם זה מותר במפורש על ידי הלקוח.
איך אני מאחסן את הפפטידים הסינתטיים שלי?
RE: רוב הפפטידים המסולפים יהיו יציבים בטמפרטורת החדר למשך 2-3 שבועות. לאחסון לטווח ארוך, עליך לאחסן פפטידים lyophilized ב--20 מעלות. יש להימנע ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים. מניחים להגיע לטמפרטורת החדר לפני הפתיחה. חיי המדף של תמיסות פפטידים מוגבלים; יש להשתמש בתמיסת פפטיד לאחר הכנה בהקדם האפשרי.
מה הטוהר של הפפטיד הגולמי והפפטיד המותל? איך מטהרים את הפפטיד? מהן הזיהומים?
RE: עבור פפטידים קצרים עם רצפים נורמליים מתחת ל-15aa, זה בדרך כלל 40-60% לפי HPLC עבור כיתה גולמית; 50-70% לפי HPLC עבור ציון מומלח. ככל שהפפטיד ארוך יותר, כך הטוהר עבור גולמי או מומלח נמוך יותר. פפטידים מטוהרים בדרך כלל על ידי HPLC באמצעות מים ושיפוע אצטוניטריל. רוב הזיהומים הם שברי פפטידים או פפטידים מחיקה, פפטידים שלא הוגנים לחלוטין, ושאריות מלח ומים.
הסבר על טוהר הפפטידים על ידי HPLC, תכולת פפטיד כוללת ותוכן פפטיד יעד.
RE: Biorunstar שולח פפטידים לפי המשקל הגולמי של האבקה הליופילית. האבקה הליופילית כוללת זיהומים כמו שברים או פפטידים מחיקה, פפטידים שלא הוגנים לחלוטין, TFA ומים שאריות. טוהר הפפטידים נמדד על ידי HPLC. זוהי כמות הפפטיד הנכונה ביחס לכל האנליטים שסופגים ב-214 ננומטר בערך (הקשר הפפטיד סופג), ככל הנראה מחיקה, חיתוך או רצפים שלא הוגנים לחלוטין וכו'. טוהר הפפטידים על ידי HPLC אינו לוקח בחשבון מים ומלחים שנמצאים בדרך כלל במדגם. תכולת הפפטידים הכוללת היא האחוז של סך הפפטידים הקיימים ביחס לכל מה שנמצא באבקת הפפטידים הליופילית. תכולת הפפטידים הכוללת נקבעת על ידי ניתוח תכולת חנקן. תוכן פפטיד יעד באבקת הפפטידים הליופילית ניתן לסכם על ידי הנוסחה: תוכן פפטיד כולל X טוהר הפפטידים על ידי HPLC.
מהי השיטה של תיוג פלואורשאין?
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanate) הוא המבשר המופעל המשמש לתיוג Fluorescein. לתיוג Nterminal יעיל, אמינוהקסאנויל בן שבעה אטומים
מרווח (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) מוכנס בין הפלואורופור (פלואורוסין) לבין N-terminus של הפפטיד. מרווח זה עוזר להפריד את הפלואורופור מנקודת ההתקשרות שלו, ובכך מפחית פוטנציאל את האינטראקציה של הפלואורופור עם הביו-מולקולה שאליה הוא מצומד והופך אותו לנגיש יותר לריאגנטים לזיהוי משני.
מרווח (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) מוכנס בין הפלואורופור (פלואורוסין) לבין N-terminus של הפפטיד. מרווח זה עוזר להפריד את הפלואורופור מנקודת ההתקשרות שלו, ובכך מפחית פוטנציאל את האינטראקציה של הפלואורופור עם הביו-מולקולה שאליה הוא מצומד והופך אותו לנגיש יותר לריאגנטים לזיהוי משני.
האם סימון C-terminal של ביוטין (או FITC) אפשרי?
RE: כן. תיוג C-טרמינלי של ביוטין (או FITC) נעשה על ידי הוספת שארית ליזין בקצה ה-C של פפטיד, וביוטין (או FITC) מחובר לשרשרת הצדדית של ליזין באמצעות קשר אמיד. המטען החיובי של ליזין מוסר.
מהו אורך הפפטיד המתאים לייצור נוגדנים?
RE: בדרך כלל, מומלץ פפטיד שאריות 10-25. לפפטיד ארוך יותר יכול להיות יותר אפיטופים, אבל יכול להיות גם סיכוי גדול יותר ליצור מבנים משניים יציבים שאינם צורות מקומיות. פפטיד קצר יותר (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
מה זה MAP?
RE: MAPS או Multi-Antigenic Peptide הוא פפטיד מסועף שבו שרשראות פפטיד ליניאריות מקושרות בקצה ה-C שלהן דרך ליבת פוליליזין, ובכך מגדילות את גודל המולקולה השלמה. זה נעשה כדי לחסל את הצימוד של פפטידים ל-KLH. עם זאת, נראה שקונפורמציה של פפטידים על MAP היא פחות גמישה, ונוגדנים המתקבלים על ידי MAP מזהים בדרך כלל חלבון מטרה בתדירות נמוכה יותר מאשר על ידי צימוד KLH קונבנציונלי. בנוסף, אין פפטיד חופשי המיוצר בעת יצירת MAPS, מה שמקשה על הסרת נוגדנים מכווני ליבת פוליליזין. טיהור של MAPS על ידי HPLC הוא קשה, ו-MAPS מסופק ללא אימות המוני בשל ההטרוגניות שלו וגודלו המולקולרי הגדול.
מדוע תמיסת הפפטיד המצומדת ב-KLH שלי נראית עכורה?
RE: KLH או Keyhole Limpet Hemocyanin הוא חלבון צובר גדול (MW=4x105 - 1x107). בגלל גודלו ומבנהו, מסיסותו במים מוגבלת, מה שגורם למראה מעונן. זה לא ישפיע על האימונוגניות וניתן להשתמש בתמיסה העכורה עבור חיסונים.
האם אתה יכול להסביר את פסגות המסה M+Na ו-M+K בספקטרום MALDI?
RE: נפוץ מאוד לראות תוספות Na (נתרן) ו-K (אשלגן) בספקטרום MALDI. הנתרן והאשלגן מגיעים מהמים המשמשים בממיסים הפפטידים. אפילו במים מזוקקים ומובטלים יש כמויות עקבות של יוני נתרן ואשלגן, שלעולם לא ניתן להסירם לחלוטין. אלה הופכים מיוננים במהלך תהליך מפרט המסה של MALDI ונקשרים לקבוצות הקרבוקסיל החופשיות של הפפטיד. מכיוון שאין מערכת לטיהור מים שתסיר כל יון נתרן או אשלגן בודד מהמים, ראיית תוספות הנתרן והאשלגן לפעמים היא שכיחה מאוד ובלתי נמנעת במפרט המסה של MALDI. אין זו אינדיקציה לכך שהפפטיד אינו טהור, ואין לבלבל אותו עם משקל מולקולרי שגוי.