בינוני הרחבת ותת שיבוט של תאים היברידומה 杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

产品信息 תיאור המוצר

产品名称

שם המוצר

杂交瘤细胞扩培及亚克隆专用培养基

מדיום להרחבת תאים היברידיומה ותת שיבוט

货号 Cat.No

BRS-MED02

规格

מִפרָט

500 מ"ל/瓶

500 מ"ל/בקבוק

产品组分

רכיבים

DMEM基础培养基:80%(体积比)

בינוני בסיס DMEM: 80% (V/V)

进口胎牛血清:10%(体积比)

סרום בקר עוברי (FBS, מיובא): 10% (V/v)

条件培养基:10%(体积比)

מותנה בינוני: 10% (V/V)

青霉素:100 单位/mL

פניצילין: 100 U/mL

链霉素:100 单位/מ"ל

סטרפטומיצין: 100 U/mL

其它添加物:单细胞增殖因子及小分子添加剂

תוספים אחרים: גורמי התפשטות-תאי יחיד ותוספי מולקולות קטנות

保存条件

תנאי אחסון

-20 מעלות 保存, 有效期 18 个月.

אחסן ב-20 מעלות, חיי מדף 18 חודשים

使用方法

הוראות שימוש

培养基融化:

37 מעלות 水浴融化本培养基,乙醇消毒外表面后置超净台备用;

注:本品融化后出现少量白色絮状物属正常现象,静置3-5min使其

沉至瓶底,然后吸取上清使用即可.

הפשרת המדיום:

מפשירים את המדיום באמבט מים של 37 מעלות. נגב את המשטח החיצוני עם 70% אתנול והנח בארון בטיחות ביולוגי לשימוש.
הערה: המראה של כמות קטנה של חומר צמריר לבן לאחר הפשרה הוא נורמלי. הניחו למדיום לעמוד במשך 3-5 דקות כדי שהצקות ישקעו, ואז אספו את הסופרנטנט לשימוש.

融合孔处理(状态良好细胞):

针对状态良好的融合孔(比如孔内培养基颜色正常或轻微发黄,且显微镜下细胞状态良好,透亮,大小正常等)可直接使用黄枪头轻轻吹打融合孔,细胞计数后按0.8-1.5cell/孔/200ul培养基铺.

טיפול בארות פיוז'ן - תאים בריאים:

עבור בארות היתוך עם תאים במצב טוב (למשל, צבע בינוני רגיל או מעט צהוב, תאים תחת מיקרוסקופ נראים בריאים, בהירים ובגודל נורמלי), פיפטט בעדינות למעלה ולמטה עם קצה פיפטה צהוב. ספור את התאים והצלחת ב-0.8-1.5 תאים/באר במדיום של 200 μL.

融合孔处理(状态欠佳细胞):

针对状态不太良好的融合孔(比如孔内培养基颜色酸化发黄或显微镜下细胞状态皱缩,发黑等)可选择2种方式进行后续亚克隆.

טיפול בארות היתוך - תאים לא אופטימליים:

עבור בארות היתוך עם תאים במצב לא אופטימלי (לדוגמה, חומצה בינונית/צהובה או תאים נראים מצומקים, כהים במיקרוסקופ), שתי אפשרויות זמינות לשיבוט משנה:

第一种方式是将融合孔细胞吸至装有1ml本培养基的24孔板内,在扩培后的第2-3日再行计数进行亚克隆铺板(0. 8-1.5cell/孔/200ul培养基),此时融合孔细胞倍增的次数有限且细胞状态良好,非常适于亚克隆铺板;

אפשרות 1: העברת תאים מבאר ההיתוך לצלחת בעלת 24 באר המכילה 1 מ"ל של המדיום הזה. לאחר 2-3 ימים של התרחבות, ספור את התאים ובצע תת שיבוט ב-0.8-1.5 תאים/באר במדיום של 200 μL. בשלב זה, הכפלת התא מוגבלת אך מצב התא טוב, מה שהופך אותו לאידיאלי עבור תת-שיבוט.

第2种方式是使用黄枪头小心吸弃融合孔上清,每孔补充200ul新鲜的本培,兇兺兺兺兺兺CO2静置培养3-4小时,然后取样细胞计数后进行亚克隆(0.8-1.5cell/孔/200ul培养基);

הסר בזהירות את הסופרנטנט מבאר ההיתוך באמצעות קצה פיפטה צהוב והוסף 200 μL מדיום טרי לכל באר. דגירה ב-37 מעלות, 5% CO₂ למשך 3-4 שעות. לאחר מכן, דגום את התאים, ספור ובצע תת-שיבוט ב-0.8-1.5 תאים/באר במדיום של 200 μL.

注:使用本司"杂交瘤扩培及亚克隆专用培养基"培养后的亚克隆一般第6-8日即可开始下游检测筛选.

הערה: תת-שיבוטים שתורבתו עם מדיום הרחבת תאי Hybridoma ותת-שיבוט מגיעים בדרך כלל לשלב המתאים להקרנה או ניתוח במורד הזרם בימים 6-8 לאחר-השיבוט המשנה.